Vitamina B12 ELISA

Imunoensaio enzimático para a determinação quantitativa de Vitamina B12 em matriz alimentar.

Introdução: A vitamina B12 como oligoelemento pertence aos formadores de quelato biologicamente importantes. A unidade básica consiste em um anel de corrina com cobalto como átomo central. O cobalto é seis vezes coordenado por quatro átomos de nitrogénio, um cianeto e um grupo dimetilbenzimidazol. A vitamina B12 forma um complexo estável, que é absorvido na parte inferior do intestino delgado, com o chamado fator intrínseco presente no suco gástrico. A falta de vitamina B12 pode levar, entre outras coisas, à anemia perniciosa. Esta doença não é gerada por uma oferta insuficiente de vitamina B12, mas pela ausência de fator intrínseco. Uma anemia perniciosa pode ser tratada com uma alta dosagem de vitamina B12.
Os procedimentos de deteção existentes são principalmente métodos microbiológicos, mas também HPLC e cromatografia em camada delgada, todos associados a uma grande quantidade de tempo e instrumentação. Com o presente kit de teste é possível determinar quantitativamente a vitamina B12 em alimentos vitaminados de forma significativamente mais rápida (2,5 a 4 horas inclusive pré-tratamento da amostra) em comparação com um ensaio microbiológico convencional (24 a 48 horas).
Descrição: O teste quantitativo de vitamina B12 é baseado no princípio do ensaio imunoenzimático. Um anticorpo dirigido contra a vitamina B12 é ligado à superfície de uma placa de microtitulação. Amostras ou padrões contendo vitamina B12 e um conjugado de vitamina B12-peroxidase são administrados nos poços da placa de microtitulação. A vitamina B12 livre e marcada com enzimas competem pelos sítios de ligação dos anticorpos. Após uma hora de incubação à temperatura ambiente, os poços são lavados com solução de lavagem diluída para remover o material não ligado. Uma solução de substrato é adicionada e incubada por 20 minutos, resultando no desenvolvimento de uma cor azul. O desenvolvimento da cor é inibido pela adição de uma solução stop e a cor fica amarela. A cor amarela é medida fotometricamente a 450 nm. A concentração de vitamina B12 é indiretamente proporcional à intensidade da cor da amostra de teste.

Características do produto:
- O kit contém reagentes para 96 determinações;
- Placa de microtitulação composta por 12 tiras com 8 poços quebráveis;
- Padrões de vitamina B12: 0, 0.4, 1, 4, 10, 40 ng/mL;
- Leitor de ELISA a 450 nm;
- Faixa padrão: 0.4 - 40 ng/mL;
- Sensibilidade analítica: 0.3 ng/mL.